(一)母种的制备 用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种)即为生产母种，可用于扩接原种。

　　配方一 马铃薯培养基（PDA）马铃薯200克 蔗糖20克 琼脂20克 水1000毫升

　　配方二 综合马铃薯培养基 马铃薯 200克 葡萄糖20克 磷酸氢二钾3克 硫酸镁1.5克 维生素B1 10毫克 琼脂20克 水1000毫升 PH值自然

　　配方三 合成培养基 马铃薯 20克 葡萄糖20克 磷酸二氢钾2克 蛋白胨5克

　　2．培养基制作方法 先将马铃薯洗净去皮（挖去芽眼） 切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15?20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它药品。 培养基的分装，应在培养基凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管插入试管内，但不要碰到管壁，装入量为试管长度1/4。装好后塞上棉塞，用线绳捆扎起来，棉塞部分用报纸包扎。

　　3．灭菌 将试管直立放入高压蒸气灭菌锅，在1.1kg/C?压力下(锅入温度达121℃)灭菌30分钟使微生物包括芽孢全部杀死。待压力降到0时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。

　　4．接种、培养 通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，7?15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。

　　(二)原种、制备 母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。

　　1．培养基配方 配方一 木屑麸皮培养基 阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1%

　　2．拌料与装袋 选用新鲜无霉变原料，充分混匀，加水比例为1：1.3左右拌匀，总含水量60%-63%。含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后，装瓶(袋)。用机械或人工装袋稍加压实，袋口用无棉盖体封口。

　　3．灭菌 灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温(121℃以上)、高压(1.1公斤/C?)条件下灭菌2小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在95-105℃之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下要维持足够时间才能达到灭菌目的，通常在100℃下维持10-12小时。

　　4．接种与培养 不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶(袋)放在箱内，用烟雾剂密闭薰蒸消毒。接种室消毒，一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次用4克，一支母种试管可接4?6瓶(袋)原种。将接种后的菌种瓶(袋)放入发菌室黑暗处培养。培养室温度22-26℃，相对湿度70%以下，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶(袋)需30?40天。

　　(三)栽培种制备 原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备，用无棉盖体封口。一瓶原种可接50-60瓶(袋)栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种相同。

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